Edwards DNA 提取法（中文翻译）

一、方法概述

Edwards DNA isolation – for strawberry or Arabidopsis

该方法可获得适用于基因分型 PCR 的 DNA。

二、Edwards buffer 配方

你提供的 protocols.io 截图还给出了一个 100 mL 配方参考：Tris 3.15 g、EDTA 0.93 g、NaCl 1.46 g、SDS 0.5 g；先用 HCl 调至 pH 8，再补足体积，最后加入 SDS。手写稿只写了终浓度，我在此将两者都保留为参考信息。

三、DNA 提取流程

1. 取一小块幼嫩叶片（手写示意为很小的一片，适合 1.5 mL 管操作），放入 1.5 mL 离心管中。
   本步目的：选择较嫩、细胞活跃且组织量适中的材料，既利于裂解，也避免样品过多导致杂质增加。
2. 用小号蓝色研磨杵初步研磨。
   本步目的：先机械破碎组织，增加后续缓冲液接触面积。
3. 加入 400 µL Edwards buffer。
   本步目的：开始化学裂解并将 DNA 释放到溶液中。
4. 继续研磨，直到看不到明显大块组织残片。
   本步目的：尽可能充分裂解组织，提高 DNA 释放效率。
5. 室温孵育约 15 min。
   本步目的：给裂解和溶出过程足够时间，使 DNA 更充分进入上清液。
6. 13,000 rpm 离心 5 min。
   本步目的：沉降细胞碎片和大颗粒杂质，便于收集含 DNA 的上清。
7. 转移约 300 µL 上清到新管中。
   本步目的：分离 DNA 溶液与沉淀/残渣，减少后续杂质带入。
8. 加入 300 µL isopropanol，轻轻颠倒混匀。
   本步目的：用异丙醇沉淀 DNA。
9. 室温孵育 5 min。
   本步目的：给 DNA 聚集沉淀充分时间。
10. 再次以约 13,000 rpm 离心 5 min。
    本步目的：将 DNA 沉淀收集到底部。
11. 倒掉上清。
    本步目的：去除沉淀液体相，保留 DNA pellet。
12. 短暂离心约 10 s，使残余液滴集中到底部；用移液器吸尽后，在 37 °C 培养箱中完全晾干约 10 min。
    本步目的：清除残余异丙醇，避免抑制后续 PCR；但需避免过度干燥导致 DNA 难以重悬。
13. 加入 50 µL 蒸馏水（distilled H₂O）重悬，4 °C 保存。
    本步目的：将 DNA 重新溶解，得到可储存、可使用的模板液。
14. 若条件允许，使用前可放置过夜以帮助充分重悬。
    本步目的：让沉淀 DNA 更完全溶解，提升使用一致性。

四、PCR 使用建议

手写稿右下角标注：Dilute 1:10 for PCR。

五、说明